Hiss serum su karbonhidrat besiyeri ve Karbonhidrat fermentasyon testi
Karbonhidrat besiyerinin hazırlanması
- C. diphtheriae için karbonhidrat setine glikoz, maltoz, sukroz ve nişasta konur. Genel Corynebacterium spp test setine ise glikoz, maltoz, galaktoz, dekstrin, sukroz ve laktoz konur. Laboratuvar bu setlerden hangisini kullanacağını göz önüne alarak şeker ve nişasta içeren karbonhidrat besiyerlerini hazırlamalıdır.
Andrade indikatörü
20 mL distile suda 100 mg asit fuksin karıştırılır. 3.2 mL 1N NaOH damlatarak ilave edilir. Bu işlem ile fuksin renksizleşmeli (saman sarısı renkte olacak).
Baz besiyeri için maddeler
Pepton 5.0 g
Na2HPO4 (anhidroz) 1.0 g
At serumu 178 mL
Andrade indikatörü 7.8 mL
Distile su 1000 mL
Baz besiyerinin hazırlanması
1 Pepton ve Na2HPO4 ılık distile suda eritilir ve 15 dk kaynar su banyosunda tutulur. Wattmann kağıt filtreden süzülür. Soğutulur. pH 7.4'e ayarlanır.
2 At serumu eklenir karıştırılır; 20 dk kaynar su banyosunda tutulur.
3 Andrade ayıracı eklenerek pH 7.7'ye ayarlanır. Burgu kapaklı şişelere 90 mL tevzi edilir. 115°C‘da 10 dk otoklavlanır.
Tam karbonhidrat besiyerinin hazırlanması
1 Şeker içeren (%1‘lik) besiyeri yapmak için;
(a) Önce testte kullanılacak her şekerin stok (%10‘luk) solüsyonu hazırlanır ve her biri 0.22 μm membran filtreden geçirilerek steril edilir; etiketlenir, saklanır.
(b) Stok şeker solüsyonundan 10 mL, aseptik olarak 90 mL baza eklenir (her şeker ayrı ayrı). Böylece elde edilen %1‘lik şekerler steril burgu kapaklı tüplere 1-1.5 mL alikotlar halinde dağıtılır. Etiketlenir ve buzdolabında saklanırlar.
2 Etanol 10 mL önceden steril edilmiş 90 mL baza, aseptik olarak, eklenir.
3 Nişasta testte %0.5‘lik konsantrasyonda kullanılır. Bunun için pratik metot 3 mL baz besiyerine bir öze dolusu nişasta ekleyerek karıştırmaktır. Tercih edilen metot ise; bir steril tüpte 0.15 g çözünebilir nişastaya 5 mL steril distile su eklenir. Sürekli karıştırılarak 5 dk kaynatılır. Karıştırılarak soğutulur. 3 mL baz besiyerine hazırlanan nişastadan 0.15 mL (steril Pastör pipeti ile 3 damla) eklenir.
Karbonhidrat fermentasyon testinin yapılışı
1 Test edilecek izolatların (pozitif ve negatif kontrol suşları dahil) taze kültürlerinden steril distile su içinde yoğun (McFarland 6-8) bakteri süspansiyonu hazırlanır.
2 Örnek sayısı kadar kullanılacak şekerler ve nişasta tüpleri bir spora dizilerek hazırlanır.
3 Her tüpe 40-50 μL yoğun bakteri süspansiyonundan konur. 37°C‘da 24-48 saat inkübe edilir. Pozitif reaksiyon tüplerde pembe-kırmızı renk oluşumu ile ayırt edilir.
Mikrobiyoloji Laboratuvarı
-
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN) Boyama Yöntemi Nedir?
-
Mantarların Boyanması
-
Laktofenol Pamuk Mavisi Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Flagella Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Bakterilerde Kirpik Boyama İçin Preparat Hazırlanması
-
Spor Boyama Solüsyonlarının Hazırlanması
-
Schaffer Fulton Yöntemi ile Spor Boyama
-
Ehrlich – Ziehl – Neelson Boyamada Kullanılan Solüsyonlarının Hazırlanışı
-
EHRLICH - ZIEHL-NEELSEN BOYAMA YÖNTEMI
-
Besiyeri Hazırlamada Kullanılan Araç Gereçler Nelerdir?
-
Karbonhidrat Fermantasyon besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
TSİ (Üç şekerli Demirli Agar) besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Çikolata Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Kanlı Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Löwenstein- Jensen Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri