Bakteri Hareketlilik Testi
Bazı bakteriler, flagella adı verilen hücre organelleri sayesinde aktif hareket yeteneğine sahiptirler. Bakterilerde hareket daha çok flagella varlığının belirlenmesi değil, hareketin gösterilmesi şeklinde ortaya konmaktadır. Makroskobik ve mikroskobik olarak yapılabilen hareketlilik testinde, uygun koşullarda geliştirilmiş 18 - 24 saatlik genç kültürlere ihtiyaç vardır. Özellikle mikroskobik hareket testinde flagellaların bakteriden kopup ayrılmamasına dikkat edilmelidir.
Yumuşak Dik Agarlı Besiyerinde Hareketlilik Testi
Pek çok fakültatif anaerob, çok hareketli olan bakteriler için önerilen yumuşak dik agarlı besiyerinde yapılan makroskobik hareket testinde, incelenecek bakteri Triptik Soy Yeast Ekstrakt Broth besiyerinde optimum sıcaklıkta 18 – 24 saat süre ile inkübasyona bırakılır.
kaybolmasına neden olabilir.
Tüplere dağıtılan yumuşak agarlı besiyerinin, sterilizasyondan sonra dik olarak donması sağlanır. Bu besiyerine genç bakteri kültüründen aşı iğnesi ile aşılama yapılır. Optimum sıcaklıkta 48 saatlik inkübasyon sonunda inokülasyon hattının yanlarına doğru yayılmış, bulanıklık şeklinde gözlenen sonuç bakterinin hareketli olduğu, sadece inokülasyon hattında gözlenen bakteri gelişimi ise hareketsiz olduğunu gösterir.
Yaş Preparasyon Tekniği
Normal bir lam üzerine, 2 – 3 öze dolusu bakteri kültürü aktarılır. Lam üzerindeki bu kültür sıvısının kenar kısmından, yaklaşık 45 o 'lik bir eğimle bir lamel temas ettirilerek yavaşça lam üzerine kapatılır. Bu aşamada lam ile lamel arasında meydana gelebilecek hava kabarcıklarının engellenmesine dikkat edilmelidir. Bu şekilde hazırlanan preparatta, lamel üzerine immersiyon yağı damlatılarak hiç bekletilmeden, mikroskopta 100 'lük objektif kullanılarak incelenir. Bu yöntem, tercihen çukur lam kullanılarak asılı damla testi ile yapılmalıdır. Asılı damla yönteminde kenarlarına ince bir hat ile vazelin sürülmüş lamelin üzerine 1 damla kültür konulur. Çukur lamın çukur kısmı bu damla üzerine gelecek şekilde kapatılır ve vazelin lam ile lamelin yapışmasını sağlar. Lam yavaşça ters çevrilir ve lamel üzerine 1 damla sedir yağı damlatılıp immersiyon objektifi ile incelenir.
Flagella Boyama Yöntemi İle Mikroskobik Hareketlilik Testi
Flagella sayısı ve dizilişi hakkında bilgi sahibi olmak amacı ile flagella boyaması yapılır. Bu yöntemde kullanılacak lamlar çok temiz olmalıdır. Bunun için önce sıcak deterjanlı su ile yıkanır. Ardından kuvvetli NaOH veya KOH çözeltisinde bekletilir. Sonra zayıf HCl ile yıkanarak saf sudan geçirilir ve etil alkol içerisinde kullanılana kadar bekletilir. Kullanılacağı zaman, bir pens yardımı ile alınarak alevde yakılır ve boya sehpasına konularak soğutulur.
18 - 24 saatlik genç ve hareketli bakteri kültüründen pastör pipeti ile bir damla alınıp lam üzerine aktarılır ve örnek lam sağa sola hareket ettirilmek suretiyle yayılır. Yayma işlemi sırasında kesinlikle öze kullanılmamalıdır. Preparat havada kendi halinde kurutulur ve Gray 'ın mordan çözeltisi damlatılarak 10 dakika süre ile bekletilir. Mordan boyanın mikroorganizmaya daha iyi nüfuz etmesini sağlayan bir maddedir. Daha sonra lam hafifçe eğilerek su ile yıkanır, Karbol fuksin damlatılarak 5 dakika süre ile boyanır. Su ile dikkatlice yıkanarak havada kurutulur. İmmersiyon yağı damlatılır ve 100 'lük objektifte incelenir. Flagella mikroskopta kırmızı olarak görülür.
Gray 'ın Mordan Çözeltisi ; Potasyum şapı (suda doymuş çözeltisinden) 5 ml ; Tannik asit (%20 'lik çözelti) 2 ml ; Civa klorid (suda doymuş çözeltisinden) 2 ml bileşimindedir. Bu maddelerin tamamı karıştırılarak hazırlanır.
Mikrobiyoloji Laboratuvarı
-
Ehrlich-Ziehl-Neelsen (EZN) Boyama Yöntemi Nedir?
-
Mantarların Boyanması
-
Laktofenol Pamuk Mavisi Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Flagella Boya Solüsyonun Hazırlanışı
-
Bakterilerde Kirpik Boyama İçin Preparat Hazırlanması
-
Spor Boyama Solüsyonlarının Hazırlanması
-
Schaffer Fulton Yöntemi ile Spor Boyama
-
Ehrlich – Ziehl – Neelson Boyamada Kullanılan Solüsyonlarının Hazırlanışı
-
EHRLICH - ZIEHL-NEELSEN BOYAMA YÖNTEMI
-
Besiyeri Hazırlamada Kullanılan Araç Gereçler Nelerdir?
-
Karbonhidrat Fermantasyon besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
TSİ (Üç şekerli Demirli Agar) besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Çikolata Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Kanlı Agar Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri
-
Löwenstein- Jensen Besiyeri formül ve hazırlanış bilgileri