Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

BLOOR METODU İLE KOLESTEROL ANALİZİ

---

Prensip :

Kloroformda eritilmiş kolesterolün, asetik asit anhidridi ve sülfirik asit ile verdiği ve kolesterol miktarı ile orantılı olan renk reaksiyonuna dayanır.

Reaktifler:

1) Bloor ayıracı ( 3 hacim etil alkol + 1 hacim eter karıştırılır.)

2) Kloroform ( saf )

3) Asetik asit anhidridi

4) Sülfirik asit

5) Asetilan karışım ( 24 ml kloroform + 15 ml asetik anhidrid + 1 ml sülfirik asit karıştırılır, soğuduktan sonra kullanılır. ) Her defasında taze hazırlanır.

6) Dijitonin çözeltisi ( 0.5 gr dijitonin %50 lik alokolde eritilir ve 100 ml’ ye tamamlanır.)

7) Kolesterol ana çözeltisi % 80 mg ( 80 mg kolesterol, 100 ml kloformda eritilir iyice karıştırılır.)

8) Kolesterol çalışma çözeltisi % 8 mg ( 1 ml ana çözeltisi + 9 ml kloroform iyice karıştırılır.)

9) Standart eğri grafiği için kolesterol çalışma çözeltisi % 20 mg ( 5 ml ana çözelti + 15 ml kloroform )

Deneyin yapılışı :


A. TOTAL KOLESTEROL :

Cam kapaklı bir tüp veya 25 ml lik bir ölçü silindiri içine

1 ml serum

24 ml Bloor ayıracı konur, kuvvetle çalkalanarak karıştırılır. Ara sıra karıştırmak sureti ile 30 dakika yan yatırılarak beklenir. Bundan sonra süzgeç kağıdı ile süzülür. Süzüntüden 5 ml alınıp bir bahar içine konur. Buharlaşması için beklenir. Eter kokusu kaybolduktan sonra kaynar su banyosu üzerinde veya etüvde alkol kısmının uçması için bekletilir. İyice kuruma sağlandıktan sonra eher içindeki kuru kalıntı iki üç kerede toplam 5 ml olmak üzere kloroformla eritilip alınır. Bu ekstre bir deney tüpüne aktarılır. Beherdeki bulaşıklık 5 ml asetilan karışımı ile çalkalanarak aynı tüpün üzerine konur.

Böylece deney tüpünde toplam hacim 10 ml olmuş olur.

Bir başka deney tüpüne

5 ml kolesterol çalışma çözeltisi % 8 mg

5 ml asetilan karışımı konur ve karıştırılır. Tüplerin hepsi 20 0C sıcaklıkta ve karanlıkta 15 dakika bekletilir. Distile su kör olmak üzere 660 nm de okunur. Numune ve standart tüplerinin optik dansitelerinden hareket ederek aşağıdaki formüle göre numune serumdaki kolesterol miktarı bulunur.

Serum kolesterol % mg : ( Numune optik dansitesi / Standart optik dansitesi ) X 200

---