Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Bordet Gengou agar (BGA) hazırlanması

---

Hazır ticari üründen BGA

Maddeler

Bordet Gengou agar baz 30 g
Gliserol 10 mL
Distile su 800 mL


Besiyerinin yapılışı

1 Malzemeler bir erlenin içinde manyetik karıştırıcı/ısıtıcı („hot-plate‟) üzerinde hafif ısıtılarak 10 dk karıştırılır; pH 6.8±0.2‟ye ayarlanır.
2 121°C‟da 15 dk otoklavlanır.
3 Otoklavdan çıkarılan besiyeri önceden 55°C'a ısıtılmış su banyosuna konur, soğuması beklenir (besiyeri miktarına göre 30-60 dk sürer).
4 Besiyeri hafif ısıtılmış manyetik karıştırıcıya konur, karıştırılmaya başlanır. Karıştırılırken aseptik koşullarda 200 mL at kanı (taze, günlük) eklenir.
5 pH tekrar ölçülür ve gerekirse 6.8±0.2‟ye tekrar ayarlanır. Bunun için;
(a) Aseptik şartlarda 2-3 mL besiyeri küçük bir tüpe alınır, donması beklenir.
(b) pH metre probu besiyerine daldırılarak pH ölçülür.
(c) pH <6.78 ise steril 1N KOH, >6.82 ise steril 1N HCl azar azar eklenerek pH ayarlanır.
6 Önceden UV lambası açılmış ve 30 dk ortam dekontaminasyonu sağlanmış odada besiyeri dökme işlemine geçilir. Bütün plaklar önceden besiyerinin adı ve hazırlama tarihi yazılarak etiketlenmiş olmalıdır.
7 Her Petriye (90 mm çaplı), ~28 mL besiyeri dağıtılır.
8 Besiyeri dökülen plaklar bir gece üzeri temiz bir örtü ile kapatılarak bekletilir.
9 Ertesi gün plaklar -kapaklar alta gelecek şekilde- ters çevrilir, naylon torbalara kaldırılır; torba üzeri de besiyerinin adı, hazırlama tarihi ve son kullanma tarihi (SKT) yazılarak etiketlenir; kapakları altta kalacak şekilde buzdolabında saklamaya alınır
10 Bu şekilde nem kaybı önlenerek saklandığında raf ömrü 2 aydır.
11 Torbaların içine aşırı nemlenme olasılığı için silika-jel paketleri konabilir.
12 Hazırlanan her besiyeri serisinden kalite kontrol yapılır.

---