Histokimyasal-Sitokimyasal Yöntemler
A. İyonların Gösterimi:
• Fe+3 iyonları: Perls reaksiyonu ve Prusya mavisi reaksiyonu ile gösterilir.
Fe+3 + potasyum ferrosiyanid ---> ferrik ferrosiyanid (koyu mavi)
• PO4 İyonlarının gösterimi: AgNO3 ile gösterilir.
• PO4 + AgNO3 ---> Ag PO4
• Ag PO4, gümüş indirgeyici hidrokinon ile muamele edilir ve siyah renkte metalik gümüş izlenir.
B. Enzimlerin Gösterimi:
• Asit fosfatazın gösterimi (Gomori): Lizozomlarda bu enzim çoktur.
Doku +Sodyum gliserofosfat Asit fosfataz Gliserol +PO4
PO4 +PbNO3 ---> PbPO4 - elektron mikroskopta görülebilir.
PbPO4 + (NH3) SO3--->Pb SO3 - ışık mikroskobunda siyah olarak izlenir.
• Dehidrogenazların gösterimi:
Tetrazol bileşiği hidrojen iyonunu alarak renkli farmazan bileşiğini oluşturur.
• Peroksidazların gösterimi:
Doku +H 2O2 (peroksidazın substratı) +DAB (3,3 diamino azo benzidin) ---> 2 H2O + DAB’ın siyah renkli oksidasyon ürünü.
Bu reaksiyonda dokulardaki hidrojen iyonunu hidrojen peroksit kullanır.
• Lipidlerin gösterimi: Dondurma mikrotomu ile kesitler alınır. Suda eriyen, alkolde erimeyen indifferent boyalarla (Osmik asit, Oil Red O, Sudan 3,4 Scharlach Rot) boyama yapılır. Glikolipidler için de yöntemler vardır.
• Nükleik asitlerin Gösterimi:
• DNA, Feulgen reaksiyonu ile gösterilir.
DNA + HCL ---> DNA’daki serbest aldehitler açığa çıkarılır. Ardından Schiff ayıracı (rengi alınmış bazik fuksin) ile muamele edilir.
DNA olan alanlar menekse-mor renkte saptanır. Floresans bir boya olan acridin orange ile DNA , sarımsı- yeşil renkte ortaya konur.
• RNA; Metil green pyronin ve acridin orange ile boyanır. RNA’nın bazik boyalara yüksek affinitesi vardır. Kesitlerin kontrolu RNA-az ile yapılır. Bazofilinin kaybolduğu alanlar RNA alanlarıdır.
DNA+akridin orange ---> sarımsı –yeşil
RNA+akridin orange ---> kırmızı
• Proteinlerin Gösterimi: İmmunositokimya, immünohistokimya, immuno-enzimatik ve immuno-floresans yöntemlerle gösterilirler.
• Karbohidratların gösterimi: Homopolisakkaritlerden glikojen ve nişaşta PAS + reaksiyon verir.
• Glikojen + periyodik asit ---> serbest aldehitler + Schiff reaktifi (H2SO4 ya da metabisülfitle rengi açılmış bazik fuksin) ile menekşe-mor renkte boyanır.
• Glikozaminoglikanlar: COOH, SO4, OH ve fosfat gruplarından dolayı polianyonik ve hidrofiliktirler. Alcian blue gibi bazik boyalarla kuvvetli boyanırlar. Asidik glikozaminoglikanlar ve asidik glikoproteinler alcian blue ile boyanırlar.
• Fe+3 iyonları: Perls reaksiyonu ve Prusya mavisi reaksiyonu ile gösterilir.
Fe+3 + potasyum ferrosiyanid ---> ferrik ferrosiyanid (koyu mavi)
• PO4 İyonlarının gösterimi: AgNO3 ile gösterilir.
• PO4 + AgNO3 ---> Ag PO4
• Ag PO4, gümüş indirgeyici hidrokinon ile muamele edilir ve siyah renkte metalik gümüş izlenir.
B. Enzimlerin Gösterimi:
• Asit fosfatazın gösterimi (Gomori): Lizozomlarda bu enzim çoktur.
Doku +Sodyum gliserofosfat Asit fosfataz Gliserol +PO4
PO4 +PbNO3 ---> PbPO4 - elektron mikroskopta görülebilir.
PbPO4 + (NH3) SO3--->Pb SO3 - ışık mikroskobunda siyah olarak izlenir.
• Dehidrogenazların gösterimi:
Tetrazol bileşiği hidrojen iyonunu alarak renkli farmazan bileşiğini oluşturur.
• Peroksidazların gösterimi:
Doku +H 2O2 (peroksidazın substratı) +DAB (3,3 diamino azo benzidin) ---> 2 H2O + DAB’ın siyah renkli oksidasyon ürünü.
Bu reaksiyonda dokulardaki hidrojen iyonunu hidrojen peroksit kullanır.
• Lipidlerin gösterimi: Dondurma mikrotomu ile kesitler alınır. Suda eriyen, alkolde erimeyen indifferent boyalarla (Osmik asit, Oil Red O, Sudan 3,4 Scharlach Rot) boyama yapılır. Glikolipidler için de yöntemler vardır.
• Nükleik asitlerin Gösterimi:
• DNA, Feulgen reaksiyonu ile gösterilir.
DNA + HCL ---> DNA’daki serbest aldehitler açığa çıkarılır. Ardından Schiff ayıracı (rengi alınmış bazik fuksin) ile muamele edilir.
DNA olan alanlar menekse-mor renkte saptanır. Floresans bir boya olan acridin orange ile DNA , sarımsı- yeşil renkte ortaya konur.
• RNA; Metil green pyronin ve acridin orange ile boyanır. RNA’nın bazik boyalara yüksek affinitesi vardır. Kesitlerin kontrolu RNA-az ile yapılır. Bazofilinin kaybolduğu alanlar RNA alanlarıdır.
DNA+akridin orange ---> sarımsı –yeşil
RNA+akridin orange ---> kırmızı
• Proteinlerin Gösterimi: İmmunositokimya, immünohistokimya, immuno-enzimatik ve immuno-floresans yöntemlerle gösterilirler.
• Karbohidratların gösterimi: Homopolisakkaritlerden glikojen ve nişaşta PAS + reaksiyon verir.
• Glikojen + periyodik asit ---> serbest aldehitler + Schiff reaktifi (H2SO4 ya da metabisülfitle rengi açılmış bazik fuksin) ile menekşe-mor renkte boyanır.
• Glikozaminoglikanlar: COOH, SO4, OH ve fosfat gruplarından dolayı polianyonik ve hidrofiliktirler. Alcian blue gibi bazik boyalarla kuvvetli boyanırlar. Asidik glikozaminoglikanlar ve asidik glikoproteinler alcian blue ile boyanırlar.
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ
