Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

CTA şeker kullanım besiyeri ve test

---

Stok şeker solüsyonu hazırlanması

1- %10‟luk şeker solüsyonları hazırlamak için; glikoz, maltoz, laktoz ve sukrozun her birinden ayrı ayrı 1 g tartılır ve her biri ayrı ayrı 10 mL distile suda eritilir.
2- Sonra her biri 0.22 μm filtre ile steril tüplere aktarılarak steril edilir (stok şeker).

Besiyeri bazı için maddeler

L-Sistin            0.5 g
Tritikaz            20 g
NaCl                 5 g
Sodyum sülfit   0.5 g
Fenol kırmızısı  17 mg
Agar                2.5 g
Distile su         900 mL

Besiyerinin hazırlanması

1- CTA baz besiyeri için yukarıda listelenen maddeler karıştırılır. pH 7.3„e ayarlanır ve 90 mL alikotlar halinde ağzı burgu kapaklı şişelere bölünür. 121°C de 15 dk otoklavlanır.
2- Şişeler 55°C su banyosuna konarak soğutulur. İişelerden 4 tanesi* ayrılır ve aseptik olarak pH‟ları ölçülür; gerekiyorsa 7.3„e yeniden ayarlanır.
3- Bu şişelerin her birine bir stok şeker solüsyonu (10 mL) aseptik şartlarda ilave edilir; karışması sağlanır. Böylece %1 şekerli CTA elde edilmiş olur.
4- Önceden şekerin adı yazılarak etiketlenmiş steril tüplere (16×125 mm, vidalı kapaklı, cam) %1 şekerli CTA‟dan 7‟şer mL dağıtılır.
5- Besiyerleri dik konumda katılaşmaya bırakılır.
* Kalan şişeler CTA baz olarak buzdolabında saklanır ve yeniden şekerli CTA gerektiğinde sıcak su banyosunda eritilip şeker eklenerek kullanılabilir.

Testin yapılışı

1- Her test edilecek Neisseria izolatı için, glikoz, maltoz, laktoz ve sukroz olmak üzere %1 şekerli CTA tüplerinden bir set hazırlanır.
2- İzolatın KKA veya ÇA‟daki bir gecelik kültürden öze ile koloni alınır.
3- Tüp besiyerinin üstteki 1/3‟lük bölümüne birkaç kez batırma ekimi yapılır. Her bir şekerin ekiminde farklı öze kullanılır. Bir tüpten diğerine madde taşınmamalıdır!
4- Ekimler 35°C‟de ve normal atmosferde 72 saat inkübe edilir.

Testin değerlendirilmesi

5- Üreyerek ekildiği tüpteki karbonhidratı kullanan Neisseria tüpteki ortamı asite dönüştürdüğünden fenol kırmızısının rengi sarıya dönüşür; besiyerinin üst kısmında gözle görülebilir sarı renk oluşması pozitif sonuç olarak değerlendirilir.
6- İnokülasyonu takiben 24 saat içinde reaksiyon gözlenebilir; ancak bazı reaksiyonlar gecikebilir. Bu nedenle 72 saat dolmadan sonuç negatif olarak değerlendirilmemelidir.

---