Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Haemophilus influenzae serogruplandırma testi

---

Materyal

Çikolata agara pasajlanmış 24 saatlik taze saf bakteri kültürü
Polivalan a,b,c,d,e,f antiserumu
Temiz lamlar
Steril cam tüpler
Steril pipet uçları
Steril %0.85 NaCl (SF)
McFarland No 3 bulanıklık standardı

Hazırlık

1 Tüm malzemeler oda ısısına gelmeleri için önceden buzdolabından çıkarılır.
2 Biyogüvenlik kabini en az 5 dk önceden çalıştırılır. Çalışılacak tüm malzemeler biyogüvenlik kabinine önceden yerleştirilir. Uygun KKD (önlük, eldiven) giyilir.
3 Steril bir cam tüpe 500 μL SF konulur ve taze pasajdan McFarland No 3 yoğunluğunda bakteri süspansiyonları hazırlanır.
4 Lam alkol ile temizlenir ve cam kalemi ile 2 bölmeye ayrılır.

Testin yapılışı

1 Bölmelere 10‟ar μL bakteri süspansiyonu konulur.
2 İlk bölmeye herhangi bir antiserum konulmaz.
3 İkinci bölmeye a,b,c,d,e,f polivalan antiserumundan 10 μL eklenir.
4 Lam bir dakika süreyle elde sürekli olarak hafif dairesel hareketlerle çevrilir.

Testin değerlendirilmesi

1 Bir dakika sonra aglütinasyon varlığı değerlendirilir.
2 Lamın ilk bölmesinde “otoaglütinasyon” gözlenmemelidir.
3 Lamın ikinci bölmesinde aglütinasyon oluşması durumunda teste monovalan antiserumlar ile devam edilir.
4 Aglütinasyon bir antiserumla gerçekleşmelidir.
5 Sonuçlar aşağıdaki gibi yorumlanır ve kaydedilir:
    4+ %100 aglütinasyon (berrak ila hafif bulanık zemin)
    3+ %75 aglütinasyon (hafif bulanık zemin)
    2+ %50 aglütinasyon (orta derecede bulanık zemin)
    1+ %25 aglütinasyon (bulanık zemin)
    Aglütinasyon yok

---