Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

HİSTOLOJİ PREPARATLARININ LAM ÜZERİNE YAPIŞTIRILMASI

---

Her mikroskobik materyal lam üzerine yerleştirilip lamelle kapatılır.
Parafin kesitlerinin lam üzerine yerleştirilmesi için  önce lamların çok iyi temizlenmiş olması gereklidir. Aksi halde ileriki işlemler esnasında lama yapışmayıp düşerler.
Lam üzerine herhangi bir tür yağın bulunmaması lazımdır. Bu nedenle lam yüzeyine parmakla dokunmamalıdır. Yeni ve hiç kullanılmamış lamlar sabunlu su ile yıkanarak temizlenir.
Kullanılmış lamlar ise lam temizleme eriyiği içinde 24 saat bekletildikten sonra akarsuda bir müddet bırakılır ve 3-4 kez saf su ile çalkalandıktan sonra hemen kullanılacaksa %95’lik alkolle yıkanıp kurulanarak kullanılır. Bir müddet kullanılmayacaksa %95’lik alkolde saklanmalıdır.
Kesitlerin lam üzerine yapıştırılması:
Parafin kesitlerinin boyanması süresince lamdan düşmelerini önlemek için kesitlerin lama iyice yapışmış olması gerekir.
Yapıştırma işi Albumin-Mayer ya da
Jelatin-Krom alum eriyiği ile yapılır.
Temiz lamlar kullanılacağı zaman küçük bir damla albumin-mayer lam üzerine damlatılır ve temiz bir parmakla bütün lam yüzeyine yayılır. Eğer albumin-mayer gereğinden fazla konularak lam üzerine yayılmışsa, lam üzerinde kalın bir tabaka oluşturur ve kesitler boyanırken bu tabakada boyanarak kirli bir preperat oluşur.
Bu nedenle albumin-Mayer’in fazlası 2. parmakla lam üzerinden alınmalıdır.
Eğer yapıştırıcı olarak Jelatin-Krom alum kullanılacaksa, lamlar daha önceden Jelatin-Krom alum eriyiğine batırılarak toz almayacak bir yerde kurutulmalıdır.
Kesilen parafin şeritler bu iki yoldan biri ile hazırlanan lam üzerine yapıştırılabilir.
Bunun için önce bu lamların bir köşesine işaret konur ve bu işaret üzerine birkaç damla saf su damlatılır. Parafin şerit uygun boylarda kesilir. Bu parçaların parlak yüzleri suya değecek şekilde lam üzerine yerleştirilir.
Lam ısıtıcı tabla (Hot -plate ) üzerine konulur. Ancak lam üzerindeki suyun parafin şeridin her tarafına kuşatacak kadar olmasına dikkat edilmelidir.
Kesitin bazı yerleri kuru kalmalıdır. Isıtma tablasının ısısı kullanılan parafinin erime noktasını geçmemelidir. 5 0C daha aşağıya ayarlanmalıdır.
Isındıkça parafin yayılacağından büküntüler ve kırışıklıklar kaybolur ve kesit iyice yayılır.
Ayrıca saplı iğnelerle de düzeltme işine yardımcı olunmalıdır. Kesitler iyice yayılır yayılmaz saplı iğne yardımı ile kesitler  kımıldatılmaksızın lam hafifçe eğilerek üzerindeki suyun fazlası akıtılır.
Yayılan parafin kesitleri taşıyan lamlar kurumaya terk edilir. Kurutma işlemi yine ısıtıcı tabla üzerinde yapılır.
Kesitlerin parafinden kurtarılması:
Kesitlerin boyanabilmesi için ilk aşamada parafinden kurtarılmaları gerekir.
Boyama genellikle sulu bir ortamda yapılacağından kesitlerin parafinden başlayarak kademe kademe suya kadar indirilmesi gerekir.
Bu işlemlerin yapılması için boyama kapları gerekir.
Temiz bir boyama kabına dizilen parafin kesitleri taşıyan lamların parafini eritilmesi için sırası ile iki ksilol banyosu gerekir.
Birinci ksilol banyosunda erimiş parafin oranı çoktur.

İkinci ksilol banyosundan sonra her birinde 5-10 dakika bırakılarak sırasıyla %100,%95,%90,%80 ve %70 alkole kadar inilip suya geçilir.
Su içinde kalma süresi çok uzatılmamalıdır. Boya hazır değilse lamlar %70 alkolde bırakılabilirler (En çok bir gece). Bu geçişler sırasında bir sıvıdan diğerine geçerken kaptaki alkolün fazlasını kesitlerin kurumamasına dikkat ederek iyice akıtmalıdır,
eğer boya alkolde hazırlanmışsa preperatları suya geçirmeden o derecedeki alkolden aynı derecedeki alkolde hazırlanmış boyaya geçirmek gerekir.
Ksilol ve alkol banyolarında mutlaka kapakları da kapalı bırakılmalıdır.

---