Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

İDRARDA KALİTATİF ALBUMİN ARAMA METODLARI

---

Trichloracetik Acid Deneyi
Sulfosalisilik Asid Deneyi
Exton Deneyi
Kaynatma Asetik Asid Deneyi
Heller Deneyi
Robert Deneyi
Potasyum Ferrosiyanür Asetik Asid Deneyi
Tanret Deneyi

Trichloracetik acid (%20) Deneyi


Bir deney tüpünün 2/3’üne kadar berrak idrar ve bunun üzerine %20’lik Trichloracetik asitten 5-10 damla konur. drarda albumin varsa bir çökelek veya bulanklk meydana gelir; yoksa bu bulanklk görülmez ve idrar berrak kalr. Çökelein azl veya çokluu, idrardaki albumin miktarna baldr. Albumin miktar az ise hafif bir bulanklk çok ise bir çökelek meydana gelir. Trichloracetik acid ile yalnz albumin çöker. Alkaloidler ve özellikle quinine, bu reaktifle çökmez. Ayrca idrar asidlendirmeye gerek yoktur. Dier bütün kalitatif deneylere tercih edilir.



Sulfosalisilik asid Deneyi

Bir deney tüpüne idrar konur ve üzerine %20’lik sülfüsalisilik asid solüsyonundan damla damla ilave edilir. drarda albumin varsa bir bulanklk veya çökelek meydana gelir. Bu reaktif ile albumose’lar dahil olmak üzere bütün albumin çeitleri aranabilir.

Exton Deneyi

50 gr. Anhidrid sodyum sülfat, 800 mL distile suda stlarak eritilir. 350C’ye kadar soutulur. 50 gr. Sulfosalisilik asid ilave edilir ve eritilir. Sonra 1 L’ye tamamlanr.

Berrak idrar ve reaktif eit miktarda kartrlarak stlr. Kaynatlmamaldr. Eer soukta bulanklk meydana gelmezse idrarda albumin yoktur. Bulanklk meydana gelip ve hafif stlmakla kaybolmayp artarsa idrarda albumin vardr. Bence Jones proteini bu reaktif ile bol bir çökelek verir ve bu çökelek kaynatmakla kaybolur.

Kaynatma Asetik Asid Deneyi

Hafifçe asidlendirilmi 10 mL kadar idrar, bir deney tüpüne konur ve kaynatlr. Bir bulanklk meydana gelirse bunun sebebi ya albuminler ya da fosfat veya karbonat tuzlardr. Tüpdeki idrara damla damla %10’luk asetik asid solüsyonu ilave edilir. Bulanklk albuminden ileri geliyorsa erimez, fosfat veya karbonattan ileri geliyorsa asid ilavesinden sonra kaybolur.

Heller Deneyi

Bir deney tüpüne az miktarda deriik nitrit asid ve bunun üzerine dikkatlice bir tabaka tekil etmek üzere ayn miktarda idrar konur. drarda albumin bulunduu takdirde bu iki svnn temas yüzeyinde keskin snrl beyaz bir halka teekkül eder. drarn albumin miktar azsa halka ancak birkaç dakika sonra meydana gelir. Bu deney çok hassastr.

Robert Deneyi

Robert reaktifi bir ksm deriik nitrik asit ile be ksm doymu magnezyum sülfattan meydana gelir.

Deney tüpüne idrar konur. Bir pipet yardmyla Robert reaktifi tüpün kenarndan idrarn altna kadar gidilir ve reaktif yava yava braklr. Eer idrarda albumin varsa iki svnn birletii yerde beyaz bir halka meydana gelir.

Potasyum Ferrosiyanür Asetik Asid Deneyi

Sulandrlm asetik asidle kuvvetlendirilmi idrar üzerine yaklak be damla %10’luk Potasyum Ferrosiyanür ilave edilir. drarda albumin varsa bulanklk meydana gelir.


idrarda Kantitatif Albumin Tayin Metodu

Purdy Metodu

Dereceli santrifüj tüpüne 10 mL berrak idrar konur. Bunun üzerine 2 mL glacial asetik asid ve 3 mL %10’luk potasyum ferrosiyanür ilave olunur. Kartrldktan sonra 3-5 dakika kendi haline braklr. Bundan sonra, phtlaan albumin tüpün dibine iyice çökünceye kadar santrifüj edilir. Çökelek miktarnn hacmi tüp üzerinden okunur. Çökelein hacmi 0.21 ile çarplr ve albumin % miktar gr. olarak elde edilmi olur.

idrarda Protein Miktarnn Tayini

Prensip:

Proteinler sülfüsalisilik asid ile çökeltilirler. Bundan sonra bulanklk derecesi spektrofotometrik olarak tayin edilir. Bulanklk derecesi mevcut protein miktar ile direkt orantldr.


Reaktifler:

% 3’lük sülfosalisilik asid solüsyonu

%0.9 sodyum Klorür solüsyonu


Yapı:

Önce idrarda proteinlerin bulunup bulunmad sülfosalisilik asid ile aranr. drarda eserden çok protein bulunduu takdirde idrar % 0.9’luk sodyum Klorür solüsyonu ile 1:20 orannda sulandrlr.


Numune Kör

idrar 1 mL 1mL

%0.9 NaCI - 5 mL

Sülfosalisilik asid 5 mL - eklenir ve sonra;

420 nm’de spektrofotometrik olarak okunur.

idrar 1:20 orannda dilue edilmise kalibrasyon erisinde bulunan miktar 20 ile çarplr.


Kalibrasyon erisinin Hazırlanması:

Normal bir serumdaki protein miktar tayin edilir. Bundan sonra bu serum 100 mL’de 100 mg. htiva edecek ekilde %0.9 sodyum Klorür solüsyonu le dilüe edilir ve aşağıdaki seri hazırlanır.

Tüp No 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Protein Sol. (100 mg/mL)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0

Distile su
0.9

---