Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Kligler Iron Agar (KIA) ve TSI agar

---

Materyal:

Kligler Agar Base                       55 g
Distile su                              1000 ml

Not: TSI besiyerinin KIA ‘dan tek farklı içerisinde sukroz bulunmasıdır

Hazırlanması:

Üretici firmanın önerileri doğrultusunda, erlen içine 55 g Kligler Agar base konur ve içine distile su eklenir. Isıtılarak iyice eritilir. pH 7.4’e ayarlanır. 16 X 25 cm boyutundaki tüplere 5-7 mL  olacak  şekilde  dağıldıktan  sonra, 121°C  de  15  dakika  otoklavlanır. Tüpler  yatık pozisyonda,  dip  kısmı  3  cm,  yüzeyi  2  cm  olacak  şekilde  ayarlanarak  dondurulur.
Etiketlenerek besiyerinin adı, hazırlanma ve son kullanma tarihleri yazılır. Kapaklı tüplerde 4 °C’de 6 ay saklanabilir. Kullanım öncesi kalite kontrolü yapılmalıdır.

Testin yapılışı:
Öze ile incelenecek bakteri  kolonisi KIA besiyerinin ortasından dibe 1 cm kalana kadar batırılır. Daha sonra besiyerinin yatık kısımına zigzag çizerek ekim yapılır. 35°C de 24-48 saat inkübe edilir.

Testin değerlendirmesi:
Reaksiyon besiyerinin iki ayrı bölgesinde meydana gelir. Yüzeyde oluşan reaksiyon aerobik, dip kısımda oluşan reaksiyon ise anaerobiktir.

• Yüzey asit – dip asit → Bakteri hem laktozu hem de glukozu fermente etmektedir.
• Yüzey alkali -dip asit → Bakteri glukozu fermente etmekte, laktozu etmemektedir.
• Yüzey alkali -dip alkali → Bakteri nonfermenterdir.
• Besiyerinde hava kabarcıkları veya çatlakların varlığı bakterilerin gaz oluşturduğunu gösterir.
• Siyah rengin oluşması ise H2S oluşumunu gösterir.

Kalite kontrol:

Her  yeni  besiyeri  hazırlandığında  kalite  kontrol  çalışması  yapılır.  Kalite  kontrolunde kullanılacak bakteriler aşağıdaki tabloda sunulmaktadır.

Tablo KIA ve TSI agar besiyerlerinin kalite kontrolünde kullanılan suşlar

Sınırlandırma:

• Test 18-24 saat içinde okunup değerlendirilmelidir.
• Erken okumalar yanlış asit-asit, geç okumalar ise yanlış alkali-alkali sonuç olarak değerlendirilebilir.
• Fazla  H2S  üretimi  glukoz  reaksiyonunu  maskeleyebilir.Eğer  bu  durum  gözlenirse glukoz fermentasyonu vardır. Eğer gözlenmiyorsa gaz üretimi kontrol edilmelidir.
• TSI  ve  KIA Enterobacteriaceae,  non-enterik Gram negatif basiller ve çeşitli aerobik Gram pozitif  basillerin identifikasyonunda kulanılmaktadır.

Kaynak:

RSHMB Ulusal Enterik Patojenler Referans Laboratuvarı

---