Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

MODİFİYE ZAK METODU İLE KOLESTEROL ANALİZİ

---

Serum proteinleri presipite edilir ve kolesterol etanol ile ekstrakte edilir. En çok kullanılan numune serumdur. Antikoagülan olarak heparin kullanılmışsa hücreler ve plazma arasında su kaymasına yol açmadığından plazma kullanılabilir. Genellikle bir koruyucu gerekmez. Kolesterol oda ısısında 5 güne kadar, buzdolabında ise –20 oC 5 yıla kadar dayanıklıdır.

Reaktifler :

1-Stok demir reaktifi ( % 2.5 g FeCl3.6H2O )

2.5 g demir 100 ml % 87 lik fosforik asitte çözülür.

2-Renk reaktifi % 0.2

8 ml demir stok çözeltisinden alınıp 100 ml konsantre sülfirik asitte çözünür. 6-8 hafta stabildir.

Deneyin yapılışı :

1) 15 ml lik test tüpüne 0.1 ml serum konur ve sürekli karıştırılarak hızlı bir şekilde 10 ml etanol eklenir. Hemen karıştırılır ve tüpün ağzı kapatılarak 10 saniye çalkalanır.

2)Presipitatı ayırmak için 5 dakika santrifüj eklenir. Gerekli sayıda 50 ml lik erlen alınır.

KÖR NUMUNE

Etanollü süpernatant - 4 ml

Etanol 4 ml -

Renk reaktifi 4 ml 4 ml

3)Etanolün altında bir tabaka olacak şekilde belli bir açı ile erlenin dip kısmına dikkatlice 4 ml renk reaktifi eklenir. 10 saniye erlen çevrilerek karıştırılır.

4)Çalkalama durdurulur. 30 dakika erlenler bekletilir. 550 nm de okunur.

Normal değerler : 45 yaşa kadar 120-260 mg/dl, 45-60 yaş 140-300 mg/dl

Analiz prensibi : Konsantre H2SO4 ile solvent ortamı yaratılarak OH kısmı dehidratasyon ve oksidasyona uğratılır. Sonuçta elde edilen kolestopolienler renk veren ürünlerdir. Fe gibi metaller oksidasyonu hızlandırır.

Kolesterol ® 3.5 kolestadiene ® pentaenilik iyon ® kolestapolien

Bu reaksiyon zincirinde sıra ile dehidratasyon, oksidasyon, oksidasyon reaksiyonları meydana gelir.

---