Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

N.meningitidis lam aglütinasyon testi

---

Materyal

Çikolata agara pasajlanmış 24 saatlik taze saf bakteri kültürü
Polivalan A, B, C antiserumu
Polivalan X, Y, Z antiserumu
Monovalan antiserumlar
W135 ve Z antiserumları
Temiz lamlar
Steril cam tüpler
Steril pipet uçları
Steril %0.85 NaCl (SF)
McFarland No 3 bulanıklık standardı

Hazırlık

1 Tüm malzemeler oda ısısına gelmeleri için önceden buzdolabından çıkarılır.
2 Biyogüvenlik kabini en az 5 dk önceden çalıştırılır. Çalışılacak tüm malzemeler  biyogüvenlik kabinine önceden yerleştirilir. Uygun KKD (önlük, eldiven) giyilir.
3 Steril bir cam tüpe 500 μL SF konulur ve taze pasajdan McFarland No 3 yoğunluğunda bakteri süspansiyonları hazırlanır.
4 Lam alkol ile temizlenir ve cam kalemi ile 3 bölmeye ayrılır.

Testin yapılışı

1 Bölmelere 10‟ar μL bakteri süspansiyonu konulur.
2 İlk bölmeye herhangi bir antiserum konulmaz.
3 İkinci bölmeye polivalan A, B, C antiserumu, üçüncü bölmeye polivalan X, Y, Z antiserumundan 10‟ar μL eklenir.
4 Lam bir dakika süreyle elde sürekli olarak hafif dairesel hareketlerle çevrilir.

Testin değerlendirilmesi

1 Bir dakika sonra aglütinasyon varlığı değerlendirilir.
2 Lamın ilk bölmesinde “otoaglütinasyon” gözlenmemelidir.
3 Aglütinasyon bir antiserumla gerçekleşmelidir.
4 Polivalan antiserumlardan biriyle aglütinasyon oluşması durumunda test monovalan antiserumlar ile tekrarlanır.
5 Polivalan antiserumlar ile herhangi bir reaksiyon gözlenmediyse W135 ve Z antiserumları ile işlem tekrarlanır.
6 Sonuçlar aşağıdaki gibi yorumlanır ve kaydedilir:

• 4+ %100 aglütinasyon (berrak ila hafif bulanık zemin)
• 3+ %75 aglütinasyon (hafif bulanık zemin)
• 2+ %50 aglütinasyon (orta derecede bulanık zemin)
• 1+ %25 aglütinasyon (bulanık zemin)
• Aglütinasyon yok

---