PAS REAKSİYONUNUN UYGULANIŞI
A. Periyodik asit çözeltisi:
Periyodık asit........................................ 1 gr
Distile su ...............................................200 cc
B.Schiff Reaktifi
Üç şekilde hazırlanabilir.
I-200 cc kaynamış su içinde 1 gr bazik fuksini çözün. Çözeltiyi 50 dereceye kadar soğutun ve 2 gr potasyum metabisülfit (K2S205) ekleyerek karıştırın. Oda sıcaklığına düştüğünde 2 cc konsantre HCl ekleyin ve karıştırın ve buna 2 gr aktif kömür ekleyin ve karanlıkta, oda ısısında bir gece bırakın. 1 nolu Whatman filtre kağıdından süzün. Çözelti ya şeffaf ya da soluk sarı renkte olmalıdır. + 4 C de karanlıkta muhafaza edilmelidir.
II- 200 cc distile su kaynarken 1 gr bazik fuksin konur. Beş dakika karıştırılır, soğutulur ve süzülür. 2 gr potasyum metabisülfit ve 10 cc % 10' luk HCl ilave edilir. buzdolabında 24 saat bekletilir. Oda ısısına çıkardıktan hemen sonra 0.5 gr karbon tozu atılır, 1 dakika çalkalanır ve 4 kat kalın süzgeç kağıdı ile süzülür. Süzülen çözelti berrak renksiz olması şarttır.
III-0.5 gr bazik fuksin, 15 cc % 10 luk HCl ile karıştırılır, sallanarak eritilir. 0.5 gr potasyum metabisülfit, 85 cc distile suda eritilir. Her iki eriyik karıştırıldıktan sonra tekrar kırmızı bir eriyik meydana gelir. 24 saat bekletilir. Rengi sararmış olan çözeltiye 0.5 gr aktif kömür tozu katılır. 1-2 dakika sallanır ve 4 katlı kalın süzgeç kağıdından süzülür. Süzülen çözeltinin berrak renksiz olması gereklidir. Schiff reaktifi buzdolabında saklanmalıdır. oda ısısında çabuk bozulur ve pembeleştiğinde kullanılmamalıdır. Birkaç hafta dayanıklıdır. Bozulup bozulmadığını şöyle anlayabiliriz. Birkaç damla Schiff reaktifi, cam kapta bulunan % 37 -40' lık formaldehit çözeltisine konur. Hemen kırmızımsı mor olursa kullanılır. Koyu mavi mor ya da reaksiyon geç olursa bozuktur, kullanılmaz.
YÖNTEM
1.Kesitler distile suya indirilir
2.Periyodik asit ile 5 dakika
3.Distile suda çok iyi yıkayın
4.Schiff reaktifi ile 15 dakika
5.Akarsuda 5-10 dakika yıkayın. Ya da 5 er dakika 3 kez taze
hazırlanmış yıkama çözeltilerinin biri ile yıkayın.
Yıkama çözeltisi
Distile su.........100cc
Metabisülfit.....500gr
Yıkama çözeltisi Çeşme suyu......................600cc
%10 luk HCl.................100cc
%10 sodyum bisülfit.......10cc
6-Akarsuda 10 dk. yıkanır.
7-İstenilen çekirdek boyası ile boyanır (Haemalum da 4 dk.).
8-Çesme suyunda 30 dk. yıkanır
9-Alkol serileri, ksilol, kapatma
Sonuçlar
Çekirdekler mavi
Glikojen ve diğer PAS pozitif reaksiyon veren alanlar erguvan rengi, menekşe
AÇIKLAMALAR
1. Reaksiyonun yoğunluğu, periyodik asit ve Schiff çözeltisinde bekletilme süresine bir miktar dayanmaktadır. Uygulayıcıya bağlı olarak değişir.
2. Metabisülfitle çalkalama genellikle gereksizdir.
3. Demirli hematoksilen PAS tekniğinde çekirdek boyası olarak çok kullanılır ancak Harris gibi alum hemotoksilenler de çok iyi sonuçlar vermektedir.
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ