POLİPEPTİT HORMON GÖSTERİMİ
Endokrin hücre granüllerindeki polipeptit hormonları birkaç yöntemle göstermek olasıdır.
Elektronmikroskobik Görünümler: İmmünositokimyasal tekniklerle özel bir polipeptid içerdiği gösterilebilen granüllerin granül büyüklüğü, şekli ve densitesi olmak üzere özel bir ultrastrüktürel görünüme sahip olmaları ile tanınabilirler. Ultrastrüktürel görünümlerle osmium kullanmadan alde¬hitle tespit edilip resine gömülmüş dokulardan alınan yarı ince-ince kesit tekniği kul¬lanarak elde edilen immunositokimyasal bulgular arasında korelasyon kurulabilir. Yarı ince kesit 1-2 mikron olarak kesilir ardından birkaç tane ince kesit onun da ardından bir yarı ince kesit da¬ha alınır. Materyalin total kalınlığı 4 mikron olduğundan, hücre kesitlerin hepsinde de vardır. Birinci kesit, pozitif hormon tayini oluşturan immunositokimyasal reaksiyonlar için kullanılır; aradaki ince kesitler nörosekretuvar granül görünümünü tayininde, en son kesit ise (yarı-ince) immünolojik kontrol kesidi olarak kullanılır. Bu teknik, polipeptit hormonun antijenik kompenenti fiksasyon veya gömme esnasında denature olmadı ise bir de¬ğere sahiptir.
Histokimyasal Teknikler: Bu teknikler en iyi yarı- spesifik tekniklerdir. Çalışmalar birkaç tekniği aynı anda uygulayarak ve sonuçlarını karşılaştırarak yapılmalıdır. Özellikle de farklı argirofil yöntemler uygulanmalıdır. Çünkü bazı polipeptid hormonlar, özel bir fiksatiften sonra bir gümüş tekniği ile boyanırken, başka bir teknikle boyanmayabilir.
İmmünositokimyasal Yöntemler: İmmunositokimyasal teknikler kullanarak polipeptit hormonların gösterimi ile kesin tayin yapılır. Aşağıdaki kriterler mutlaka yerine getirilmelidir.
1-Saflaştırılmış doğal veya sentetik antijen, hangi antibodiye karşı kullanılacaksa hazır olmalıdır. Günümüzde birçok barsak hormonu için uygun antijenik materyal vardır.
2-İncelenecek doku, araştırılan polipeptid hormonun antijenik kompenenti değişmeden kalacak şekilde muhafaza edilmelidir.
3-Diğer polipeptit hormonlarla yapısal olarak ilgili olan çapraz reaksiyonlar olmamalıdır. Tüm gerekli kontroller yapılmalıdır.
4-Ortaya çıkan herhangibir antijen-antikor reaksiyonu hemen görülmelidir.
Eğer saf spesifik antibodiler varsa birinci problem fiksatifin seçimidir. Gastrin, insulin ve pankreatik glukagon için aldehit fiksasyonu uygundur ve parafine gömülmüş materyelde gösterilebilir. Dokunun freeze drying’ inden sonra 55 derecede sir vapour faz fiksatif olarak cros-linking ajanı olan dietil pirokarbonat kullanarak sekretin, enteroglukagon, gastrik inhibitör polipeptid (GIP), APUD sistemde belirlenen yeni bir hormonun, antijenik determinantlarının fiksasyona duyarlılık yeteneği saptanmalı, uygun fiksasyon kullanılmalı ve antijen-antibodi komp¬leksi için floresans mı yoksa peroksidaz tekniği mi kullanılacağına karar verilmelidir.
İmmunofloresans Yöntemler: Antijen gösterimi için kullanılan teknikler bir ya da iki basamaklı olabilir. Bir basamaklı (direkt) tekniklerde antikor genellikle fluorescein isothiocyanan uygun bir fluorokrom ile konjuge olur. İki basamaklı tekniklerde işaretlenmemiş antikorun (ör¬neğin rabbit anti human gastrin) önce kriostatla alınmış kesitteki antijenle reaksi¬yona sokulur; daha sonra spesifik antikorun (örnek goat anti-rabbit IgG) ortaya çık¬tığı hayvanın serum IgG sine karşı işaretlenmiş bir antikor uygulanır. Üretilen her spesifik antiserum için antiserumların uygun derişimlerinin çalışılmasına gereksinim vardır.
İmmünoperoksidaz Yöntemler: Bir işaretleyici olarak fluorokromdandan ziyade peroksidazın kullanımı bazı avan¬tajlara sahiptir. Öncelikle, ışık mikroskobik preperatlarda daha kalıcıdır ve alalade bir ışık mikroskobu ile incelenebilir ve zıt boya da yapılarak histolojik ayrıntılar da aynı zamanda aynı kesitde değerlendirebilir. İkinci olarak, teknik aynı zamanda immunoelektron sitokimya da uygulanabilir, halbuki floresans teknikler bu tekniğe uygu¬lanamaz.
Özetle, fiksatifle indüklenmiş floresans kullanarak spesifik olarak biyolojik aminleri göstermek mümkündür. Uygun bir histokimya, normal fiksasyon ve gömme şartları altın¬da 5-HT’ yi varlığını belirleyen amin-aldehit indirgeyici kompleksi gösterir. Salgı granülleri içindeki polipeptid hormonları gösteren çok çeşitli histokimyasal görüntülüme tekniği mevcuttur. Kombine olarak kullanıldıklarında ve özellikle de birkaç farklı argirofil teknik kullanıldığında kısmen yarı-spesifik olurlar. Ultrastrüktürel teknikler tek başına, granül boyutu, şekli ve densitesi hakkında bilgi sağlarlar fakat bu hormonlar için kesin sonuç veren teknikler, uygun olarak korunan dokuya spesifik antikorları immünofloresans veya immünoperoksidaz yöntemleri ile uygulamaya dayanmaktadır.
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ