Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Tinsdale agar besiyerinin hazılanması

---

200 mL için gerekli maddeler

Agar baz için

Tinsdale agar baz 9.0 g
Deiyonize su 200 mL

Suplement için

At serumu 20.0 mL
L sistin solusyonu, %20‘lik 0.24 mL
Potasyum tellürit, %2‘lik 2.5 mL
Sodyum tiyosülfat, %2.5‘luk 3.0 mL

Agar bazın hazırlanması

1 Tinsdale agar baz tartılır.
2 Üzerine 200 mL deiyonize su eklenir.

Suplement hazırlanması

1 L sistin solüsyonu (%20‘lik): 2 g L sistin tartılır. 10 mL 2M HCl eklenir. Solüsyon kendinden sterildir. Karanlıkta (vida kapaklı kahverengi şişede veya alüminyum folyo kaplanmış şişede), oda sıcaklığında, 6 ay saklanır.
2 Potasyum tellürit solüsyonu (%2‘lik): 2 g potasyum tellürit tartılır. Steril 100 mL deiyonize su eklenir. Solüsyon kendinden sterildir. Karanlıkta (vida kapaklı kahverengi şişede veya alüminyum folyo kaplanmış şişede), oda sıcaklığında, 6 ay saklanır.
3 Sodyum tiyosülfat (%2.5‘luk): 0.25 g sodyum tiyosülfat tartılır. Steril 10 mL deiyonize su eklenir. Her seferinde taze olarak hazırlanır ve filtrasyon ile steril edildikten sonra besiyeri için gerekli olan miktar eklenir.
4 At serumu oda ısısına getirilir.

Besiyerinin dökülmesi

1 Otoklavdan çıkarılan besiyeri önceden 55°C'a ısıtılmış su banyosuna konur, soğuması beklenir (besiyeri miktarına göre 30-60 dakika sürer).
2 Besiyeri hafif ısıtılmış manyetik karıştırıcıya konur, karıştırılmaya başlanır.
3 200 mL besiyeri için 0.24 mL L sistin solüsyonu, 2.5 mL potasyum tellürit solüsyonu, 3 mL sodyum tiyosülfat solüsyonu ve 20 mL at serumu eklenir.
4 İyice karışması beklenir ve tekrar pH kontrolü yapılır. pH kontrolü ve takip eden adımlar Ek-1‘de ―Besiyerinin dökülmesi‖ başlığının altındaki 3-6. maddelerde verildiği şekilde yapılır.

---