Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

ZAK METODU İLE SERUM KOLESTEROL TAYİNİ

---

( TOTAL-ESTER- SERBEST KOLESTEROL )

Prensip : Asetik asit ile eritilmiş kolesterolün demir-3 klorür ve sülfürik asit ile verdiği ve miktarla orantılı olan kırmızı menekşe renk reaksiyonuna dayanır.

Reaktifler :

1-) FeCl3 ( 84 mg FeCl3 bunun yerine 140 mg FeCl36H2O alınır, 100 ml glasial asetik asit içinde eritilir. Koyu renkli cam kapaklı şişede saklanır. )
2-) Sülfirik asit d:1,84 p.a.

3-) Dijitonin çözeltisi, %0.5 gr. ( 0.5 gr dijitonin %50’ lik alkolde eritilir.)

4-) Alkol- aseton karışımı ( eşit hacimde etil alkol %95 ve aseton karışımı)

5-) Saf aseton

6-) Kolesterol ana çözeltisi % 100 ( 100 mg saf kolesterol asetik asitde çözünür ve 100 ml’ye tamamlanır )

7-) Kolesterol çalışma çözeltisi ( 10 ml ana çözelti + 90 ml asetik asit )

8-) Glasial asetik asit

Deneyin yapılışı


A-) TOTAL KOLESTEROL

Bir santrifüj tüpüne, 0.1 ml serum ve 4 ml FeCl3 konur ve karıştırılır, 30 dakika kendi halinde bırakılır. Bundan sonra santrifüj edilir.

Bir deney tüpüne,

2 ml santrifüj tüpündeki süpernatan kısımdan alınarak konur.

2 ml asetik asit

2 ml sülfirük asit konur ve karıştırılır.

Aynı anda başka bir deney tüpüne kör deney olarak,

2 ml FeCl3

2 ml asetik asit

2 ml sülfirk asit konur ve karıştırılır. 30 dakika beklenir. 560 nm de okunur. Standart eğri grafiğinde serumda kolesterol miktarı % mg olarak okunur.

B-) SERBEST KOLESTEROL

Bir deney tüpüne

4 ml alkol- aseton karışımı

0.5 ml serum konur. Kaynayan bir su banyosuna daldırılarak birkaç saniye tutulur. Çıkarılıp soğutulduktan sonra alkol- aseton karışımı ile 5 ml ye tamamlanır.

Karıştırılıp, süzülür.

Bir santrifüj tüpüne

1 ml yukarda ki süzüntüden

1 ml dijitonin çözeltisi konur, karıştırılır. 10 dakika bekledikten sonra santrifüj edilir. Üstteki sıvı atılır, dipteki çökelti üzerine 2 ml aseton konur, karıştırılarak ümülsiyon haline getirilir. Tekrar santrifüj edildikten sonra üstteki sıvı kısım atılır.

Çökelti üzerine 4 ml FeCl3 konur ve eritilir.

Bir deney tüpüne,

2 ml yukarıda anlatılan eriyik

2 ml asetik asit

2 ml sülfirik asit konur, karıştırılır. 30 dakika beklenir. Kör deney total kolesterolde anlatıldığı gibi hazırlanır.

560 nm de okunur.

C-) ESTER KOLESTEROL

Ester kolesterol : Total kolesterol – Serbest kolesterol
Standart eğri grafiğinin hazırlanması

30 dakika oda sıcaklığında beklenir, köre karşı 560 nm de okunur. Logaritmik kağıda standart eğri grafiği çizilir.

Yorumlama : Normal değerler %150-190 mg ( Total kolesterol )

Ester kolesterol : Totalin %65-75

Ağır karaciğer yetersizlikleri, ağır enfeksiyon hastalıklarında kolesterol düzeyinde artış görülür. Lipoid nefroz, retansiyon ikteri, miksödem, diyabet, ateroskleroz ve ksantomatozda kolesterol düzeyinde artış görülür.

Karaciğer koması ve sirozda ise kolesterol ester düzeyinde azalma gözlenir.

---