NÜKLEİK ASİTLER İÇİN METİL GREEN-PYRONİN YÖNTEMİ
Pappenheim, bazik boyalardan metil green ile pyronin’in karıştırılması ile kromatinin yeşil, bazofilik inklüzyon cisimciklerini (genellikle RNA) kırmızı boyadığını göstermiştir. Bu yöntem, Unna tarafından fenol‘ün kullanımı ile geliştirilmiştir ve Unna - Pappenheim tekniği olarak bilinmektedir. DNA ve RNA’nın differensiyel boyamasında 2 bazik boyanın kullanımı mantıksız görülmektedir fakat 2 boyanın kimyasal affinitelerindeki küçük değişiklikler dokularda farklı boyanmalarını sağlamaktadır. Metil green ve pyronin, düşük pH’da (1,5) total pyronin (kırmızı) boyama vardır ve yüksek pH’da (9,0) metil green predominanttır. Bu iki seviyeler arasında genellikle (pH 4.8) her iki boya farklı şekilde hareket eder. Ne metil green ne de pyronin DNA veya RNA için spesifikdir. Fakat pratikte metil green DNA için çok seçicidir, pyronin ise RNA için spesifik olabilir.
Yöntemler:
DNA ve RNA için metil green–pyronin boyası
DNA (kromatin) ........................ yeşil veya mavi – yeşil
RNA (çekirdekcikler) .................gül kırmızı
b- DNA ve RNA için gallocyanin – krom alum yöntemi
DNA...........mavi
RNA .......... mavi
3- Nükleik asitler için floresans boyama: Florokrom acridin orange taze dokularda, taze veya tespit edilmiş yaymalardaki DNA ve RNA’nın gösteriminde kullanılabilir. DNA yeşil, RNA ise kırmızı floresans verir.
Yöntemler:
Nükleik asitler için acridin orange tekniği
DNA (Çekirdekler)...............................................................yeşil
RNA (nükleoluslar ve stoplazmik nükleik asitler )................kırmızı
Fibröz doku .........................................................................yeşil
Ortam ..................................................................................siyah
Hoechst yöntemi: Floresans vital boyama tekniğidir.
Propidium iodide: Floresans vital boyama tekniğidir.
4- Nükleik asitler için ekstrasyon yöntemleri
DNA ve RNA için boyama tekniklerinin spesifik kontrolu geride mukopolisakkaritler gibi diğer bazofilik maddeleri bırakarak nükleik asitlerin uzaklaştırılması ve denaturasyonunu sağlayan ekstrasyon yöntemleri ile yapılır. İki tip işlem vardır: Deoksiribonükleaz ve ribonükleaz’ın kullanıldığı enzimatik işlem, kuvvetli asitlerin kullanıldığı kimyasal işlem
Uygulama Yöntemleri:
Ribonükleaz ekstrasyon teknikleri
RNA ....................ekstrakte olur
DNA.....................etkilemez
Asidik ekstrasyon Yöntemleri:Perklorik asit ( HClO4) hem DNA’yı hem de RNA’yı ekstrakte eder. Fakat RNA daha hızlı uzaklaşır. Trikloroasetik asit hem DNA’yı hem RNA’yı uzaklaştırır fakat differensiyel ekstrasyon için uygun değildir. DNA, Bouin sıvısındaki hidroliz ve anilin ile muamele ile de ekstrakte olabilir.
Diğer ekstrasyon yöntemleri: Safra tuzları ile nükleik asitler ekstrakte olur.
Histoloji
-
Endosülfan ve okratoksin-A’nın birlikte sıçanlarda toksisitesi: histopatolojik değişiklikleri
-
Histoloji Pdf Ders Notları
-
DEKALSİFİYE EDİLMEMİŞ KESİTLERİN HAZIRLANIŞI
-
DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
-
KELATLAMA AJANLARI
-
ELEKTROLİTİK DEKALSİFİKASYON
-
ASİT DEKALSİFİKASYON SIVILARI
-
Histopatoloji nedir ?
-
KEMİK DOKUSU VE DEKALSİFİKASYON
-
MSS’DE DEJENERE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
MARKSCHE’DEN BOYASI (Spielmayer, Benda)
-
MSS‘DE MİYELİNİN GÖSTERİMİ
-
KARIŞIK OLAN TEKNİK
-
BİELSCHOWSKY TEKNİĞİ
-
GÜMÜŞ ÇÖKTÜRME YÖNTEMLERİ