Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

CTBA besiyerinin hazırlanması

---

1000 mL besiyeri için gerekli materyal

Agar baz için

Lab Lemco Powder            10.0 g
Pepton                             10.0 g
NaCl                                 5.0g
Agar                                 18.0g
Deiyonize su                  1000 mL

Suplement için

L sistin                                        50 mg
Potasyum tellürit, %2‘lik               18 mL
Koyun kanı                                  50 mL

Agar bazın hazırlanması

1 Agar baz için listelenen maddeler tartılır. Deiyonize su eklenir. Manyetik karıştırıcıda ısıtılarak karıştırılır. pH‘sı 7.4±0.2‘ye ayarlanır. 121°C‘de 20 dk otoklavlanır.

Suplementin hazırlanması

1 %2‘lik potasyum tellürit hazırlanır. Bunun için 2.0 g potasyum tellürit tartılır; 100 mL deiyonize su eklenir. Solüsyon kendinden sterildir. Karanlıkta (vida kapaklı kahverengi şişede veya alüminyum folyo kaplanmış şişede), oda sıcaklığında, 6 ay saklanır.
2 L sistin (50 mg) tartılır.
3 Koyun kanı (bir litre besiyeri için 50 mL) oda ısısına getirilir.

Besiyerinin dökülmesi

1 Otoklavdan çıkarılan besiyeri önceden 55°C'a ısıtılmış su banyosuna konur, soğuması beklenir (besiyeri miktarına göre 30-60 dakika sürer).
2 Besiyeri hafif ısıtılmış manyetik karıştırıcıya konur, karıştırılmaya başlanır. Üzerine koyun kanı, L-sistin ve %2‘lik potasyum tellürit (listede verilen miktarlarda) eklenir.
3 İyice karışması beklenir ve tekrar pH kontrolü yapılır. Bunun için; (a) Aseptik şartlarda 2-3 mL besiyeri küçük bir tüpe alınır, donması beklenir. (b) pH metre probu besiyerine daldırılarak pH ölçülür. pH, steril 1N HCl ve steril 1N NaOH kullanılarak 7.4±0.2‘ye ayarlanır.
4 Önceden UV lambası açılmış ve ~30 dk ortam dekontaminasyonu sağlanmış odada besiyeri dökme işlemine geçilir. Bütün plaklar önceden besiyerinin adı ve hazırlama tarihi yazılarak etiketlenmiş olmalıdır.
5 Her Petriye (90 mm çaplı, tek kullanımlık), ~28 mL besiyeri dağıtılır. Besiyeri dökülen plaklar bir gece üzeri temiz bir örtü ile kapatılarak bekletilir.
6 Ertesi gün plaklar -kapaklar alta gelecek şekilde- ters çevrilir, naylon torbalara kaldırılır; torba üzeri de besiyerinin adı, hazırlama tarihi ve son kullanma tarihi (SKT) yazılarak etiketlenir; buzdolabında saklamaya alınır. Bu şekilde nem kaybı önlenerek saklandığında raf ömrü 2 aydır. Torbaların içine aşırı nemlenme olasılığı için silika-jel paketleri konabilir. Hazırlanan her besiyeri serisinden kalite kontrol yapılır.

---