Biyologlar - Biyolojiye Gerçekçi Yaklaşım

Haemophilus influenzae için ß-laktamaz testi

---

Nitrosefin testi
Bu test ß-laktamaz taraması için disk üzerine konan koloniye reaktif damlatılarak yapılır .
Testin yapılışı:
1 Nitrosefin diski steril forseps yardımıyla temiz bir lam üzerine konur; bir damla distile su eklenir.
2 Steril silgiç veya öze ile saf taze kültürden bir koloni alınır.
3 Silgiç veya öze ile alınan koloni nemlendirilmiş diske sürülür.
4 Renk değişimi açısından disk beş dakika süre ile gözlenir.
5 ß-laktamaz üreten izolatları içeren disklerde karakteristik kırmızı/pembe renk değişimi gözlenir.

Modifiye asidometrik agar plak metodu

H.influenzae izolatlarının ß-laktamaz aktivitelerinin araştırılması için kullanılan ayırt edici bir agar plak metodudur. Penisilin ve fenol kırmızısı besleyici özelliği olmayan bir agar plakta birleştirilir. ß-laktam halkasının penisilinden ayrılması sonucu oluşan penisiloik asit ile ortamın asiditesi artar. Bu değişiklik pH indikatörünce saptanır ve agarda renk değişimi gözlenir .
Testin yapılışı:
1 ß-laktamaz agar plağının farklı noktalarına H.influenzae kolonileri konur. Bir plakta aynı anda çok sayıda koloni test edilebilir. Kolonilerin doğru bir şekilde işaretlenmiş olmasına özen gösterilir.
2 ß-laktamaz pozitif ve ß-laktamaz negatif olduğu bilinen kontrol suşları da teste alınır.
3 Agar plaklar, 35°C‟de 15 dakika inkübe edilir.
4 Agar plakları, koloniler etrafında renk değişimi olup olmaması açısından değerlendirilir.
5 Pozitif kontrol suşuna ait kolonilerin etrafındaki agar sarı renkte iken negatif kontrol suşu kolonilerini çevreleyen agarda herhangi bir renk değişimi gözlenmez.

---